Описание:

Используя пептидное отображение, можно выявить тонкие изменения в первичной структуре белка или антитела, которые могут повлиять на активность белка или сродство связывания.Пептидное отображение с помощью LC-MS/MS является одним из самых мощных качественных анализов для подтверждения первичной последовательности белков или антителаЭта услуга может быть использована для сравнения различных партий одних и тех же белков, антител или биоподобных препаратов.

Услуга анализа картографирования пептидов LC-MS/MS включает:

• Антитело/белок денатурируют, редуцируют и переваривают с помощью протеолитического фермента, такого как LysC или трипсин.
• Необязательно: для увеличения охвата последовательностью белка используется второй протеолитический фермент.
• Полученные пептидные смеси отделяют на HPLC с обратной фазой. Хроматограф ультрафиолетовой абсорбанции генерируется при УФ 214 нм.
• После разделения HPLC проводится дальнейший анализ с помощью масс-спектрометрии высокого разрешения (Thermo Fisher Orbitrap Velos или Fusion).
• Пептидная карта белка генерируется для сравнения с эталонным белком.
• Пики анализируются в первичной последовательности.
• Факультативно (две или более образцы): проводится оценка сопоставимости для оценки различий между белками от партии к партии или для сравнения биоподобных препаратов.

Информация, которую необходимо предоставить:

• Подтверждение первичных последовательностей (покрытие последовательности: 60-90% с использованием одного фермента; > 98% с использованием двух или более ферментов).
• Гликопрофилирование N-связанных олигосахаридов (гетерогенность гликоформ и приближение занятости участка).
• Определение и приблизительная количественная оценка ПТМ, таких как деамидирование, окисление,Формирование пироглутамата в N-термине и обработка Лиса в C-термине (можно обнаружить измененное положение аминокислот и % модификации).
• Оценка сходства различных партий.
• Оценка сопоставимости биоаналогов.

Обработка проб: денатурация, редукция/алкиляция и ферментативное переваривание с последующим LC-MS или LC-MS/MS.