Подробное введение

Для достижения наилучшего эффекта производства антитела необходимо тщательно спроектировать полипептид антигена, который должен соответствовать одному из основных условий: в процессе иммунизацииантиген не вызовет чрезмерного иммунного ответа, и в то же время может вырабатывать антитела, которые связываются с интересующим белком.

Как правило, рекомендуется, чтобы длина последовательности антигенного полипептида составляла от 8 до 20 аминокислотных остатков.существует риск того, что специфичность полипептида будет недостаточно сильной, а способность связывать генерируемое антитело с носителем белка будет недостаточно сильной.Однако, если длина последовательности превышает 20, можно будет ввести вторичную структуру, и полученное антитело может потерять свою специфичность, и чем длиннее пептидная цепь, тем более эффективным будет использование антител.чем сложнее синтезироватьБлагодаря многолетнему опыту синтеза сложных пептидов,KS-V Пептид может эффективно и быстро предоставить высокочистые готовые антигенные пептиды, чтобы помочь вашему исследованию и разработке.

Заявления

Хотя большинство коротких, линейных пептидных фрагментов белков не структурированы в водном растворе,было показано, что ряд иммуногенных и антигенных пептидов имеют конформационные предпочтения для структурированных формИспользуя, в основном, спектроскопию NMR и CD, удалось обнаружить и количественно определить довольно небольшие популяции бета-обратных, спиральных и зарождающихся спиральных конформаций.Недавние исследования показали, что наличие структурированных форм коррелирует с расположением эпитопов Т-клеток и/или В-клеток в пептидных последовательностях.Рентгеновские кристаллические структуры комплексов между пептидами и антипептидными антителами часто показывают, что пептиды связаны в бета-обратных конформациях,и присутствие спирали в одном комплексе пептидов-антитела было показано спектроскопией NMR. Studies of peptides free in solution and bound to anti-peptide antibodies in the crystal indicate that the structure of the principal neutralizing determinant of HIV-1 probably includes at least one beta-turn in a highly conserved regionЭти результаты могут быть потенциально использованы при разработке вакцин на основе пептидов.

Преимущества использования пептидных антигенов

Прежде всего, пептидные антигены предлагают умное решение для генерации антитела в случаях, когда последовательность аминокислот белка-мишени известна, но сам белок недоступен.или структурно слишком сложный, чтобы получить его в виде структурно стабильного и нетронутого белка (e.g. определенные трансмембранные рецепторы, ионные каналы и т.д.).Пептидный иммуногенный подход предлагает гибкость в выборе и разработке антигенов для доменов белка-мишени в качестве дополнительного преимущества.Пептидные антигены также очень полезны для создания антител против посттрансляционно модифицированных мест связывания на целевых белках.

Другие преимущества::

• Эпитоп четко определен с самого начала.
• Нужна только последовательность белка.
• гораздо меньше шансов на перекрестную реакцию
• Антиген полностью синтетический, что экономически выгодно и обычно обеспечивает очень короткие сроки поставок.

Стратегии разработки пептидных антигенов

Хотя многие последовательности пептидов могут быть иммуногенными, не все они одинаково эффективны в создании антитела с реактивностью против белка-мишени.Успешное создание антитела с помощью пептидных антигенов зависит от нескольких факторов, которые необходимо учитывать при разработке, в том числе:

точность последовательности аминокислот белка-мишени
прогнозируемая 2 / 3airy структура цельного белка
выбор доменов/регионов белка, имитируемых пептидным антигеном
необходимость конъюгирования пептидных антигенов к более крупному белку-носителю
легкость синтеза некоторых пептидных последовательностей
Следовательно, для проектирования пептидных антигенов применяются следующие общие рекомендации:

Убедитесь, что были идентифицированы правильные виды и последовательности белков.
Выбираем пептидный антиген из растворительно доступной области белка.это области, обнаруженные на поверхности белка, которые контактируют с водной (гидрофильной) средой растворителя.Некоторые области белка могут быть недоступны для антитела, например, трансмембранные области или центр глобулярного белка.

Важным преимуществом является то, что пептидные антигены могут быть разработаны для покрытия конкретного эпитопа интереса.Некоторые домены могут присутствовать и в других белкахЭти последовательности следует избегать, чтобы минимизировать вероятность нежелательной перекрестной реакции и таким образом оптимизировать общую специфичность антитела.Наилучшим образом подбираются последовательности с минимальной последовательностью гомологии, чтобы уменьшить нежелательную связь с белком, не являющимся мишенью..

В зависимости от трехмерной структуры целевого домена в цельном белке могут потребоваться методы ограничения для оптимального имитации третичной структуры антигена.Как один из специалистов по мимике поверхности белка, KS-V располагает различными (частично собственными) технологиями для проектирования и синтеза конформационно- ограниченных пептидных антигенов.

Гены часто слишком малы, чтобы генерировать значительный иммунный ответ без предварительной конъюгации с белком-носителем, таким как KLH, BSA или OVA.Поэтому обычно рекомендуется использовать конъюгаты пептида ∙ белка-носителя..

Синтез пептидных антигенов

При проектировании пептидных антигенов следует также учитывать легкость синтеза специфических пептидных последовательностей.и пептиду благоприятно включать аминокислоты, способствующие иммуногенности (такие как базовые и ароматические аминокислоты)Для достижения растворимости пептидов следует избегать длинных цепочек гидрофобных остатков.по крайней мере один заряженный остаток (аргинин), глутамин, аспартиковая кислота или лизин) должны быть включены в каждые пять аминокислот.Растворимость пептидов также может быть улучшена путем консервативной замены или добавления полярных остатков в N- или C-концы.При проектировании антигенов предпочтительно избегать сложных областей, таких как бета-листы или альфа-гелисы, а вместо этого стремиться к гибким областям.

KS-V применяет свои самые современные возможности и опыт для синтеза пептидных антигенов, включая (при необходимости) конформационные ограничения, PTM, конъюгацию или биотиниляцию.Для большинства проектов по созданию антитела рекомендуется чистота не менее 85% для любого пептидного антигена.Однако, если пожелать, мы можем предоставить антигены с более высокой чистотой также. мы обычно синтезировать приблизительно 10 мг пептида, который обычно достаточно для белка-конъюгации,ЭЛИСА-скриннинг и, при желании, построение установки хроматографии матрицы аффинности.